作者：罗荣城 尤长宣
【摘要】 树突状细胞 (Dendritic cell, DC)是人体内功能最强大的抗原递呈细胞，被广泛用于肿瘤的免疫治疗研究。前期的体外实验和动物实验表明，以适当形式的肿瘤抗原加载的DC疫苗能够激活可识别、杀伤肿瘤细胞的抗原特异性T细胞，并可产生免疫记忆效应。大量的临床试验研究也取得令人鼓舞的结果，显示了DC疫苗抗肿瘤免疫治疗的巨大应用前景。予以瘤细胞全部抗原信息 (如肿瘤细胞裂解物、肿瘤细胞提取物、肿瘤细胞的总RNA或经过灭活的完整的肿瘤细胞与树突状细胞的融合 )修饰DC成为最直接的一种方法。基于细胞性肿瘤抗原易于获取和制备，因而应用全细胞性肿瘤抗原冲击致敏DC的方法来制备DC疫苗不失为一种简便而有实效的方法，有较大的临床应用潜力，它也是目前临床研究应用最广泛的方法之一；肿瘤抗原肽(包括合成肽) 或肿瘤细胞相关抗原(肿瘤抗原、分化抗原、肿瘤独特型抗体、癌基因及抑癌基因产物、粘蛋白等)刺激DC制备DC疫苗用于肿瘤治疗的研究已从实验室走向临床，不少临床研究取得了令人满意的结果；分子生物学的发展使核酸扩增成为可能，肿瘤抗原RNA或相应的 cDNA文库为肿瘤抗原的来源提供了方法。通过核酸扩增、差异筛选等方法获得足够的肿瘤细胞特异性mRNA，从而解决疫苗制备时肿瘤细胞来源困难及其特异性问题，避免诱发自身免疫性疾病的危险。同时经基因转染树突状细胞可持续表达肿瘤抗原，避免了前两种疫苗因抗原解离或降解而影响其功能的不足。但基于花费高及缺乏方便性，其商业可行性值得考虑，安全性更是不容忽视的问题。因此，此方法制备DC疫苗用于肿瘤治疗的研究进入临床试验的为数不多，但它仍是目前DC疫苗研究的热点。
【关键词】 树突状细胞；肿瘤；临床研究
树突状细胞 (Dendritic cell, DC)是人体内功能最强大的抗原递呈细胞，具有摄取、加工抗原，以MHCⅠ、Ⅱ类肽结合物的形式递呈抗原并促进T、B淋巴细胞增殖的能力，在天然免疫和获得性免疫中都发挥着极其重要的作用。其参与抗肿瘤的主要机制是通过树突状细胞对肿瘤抗原的摄取，发育成熟后在膜上高表达MHCⅠ、Ⅱ类分子，并提呈大量的肿瘤抗原给T细胞受体（TCR）。同时，DC提高协同刺激分子B7-1、B7-2和CD40等的表达，并使T细胞被激活。而且DC与T细胞结合后可分泌大量的IL-12，IL-12可强有力地诱导T、NK、LAK细胞产生大量TNF-γ、穿孔素和颗粒酶，增强CTL、NK对靶细胞的溶解作用。自从1991年Steinman首次发现DC这一强大的抗原递呈功能以来，DC就被广泛用于肿瘤的免疫治疗研究。前期的体外实验和动物实验表明，以适当形式的肿瘤抗原，不论是蛋白质、多肽、还是核酸加载的DC疫苗都能够激活可识别、杀伤肿瘤细胞的抗原特异性T细胞，并可产生免疫记忆效应。这些结果极大地增强了人们的信心 ,将抗原负载的DC作为肿瘤疫苗应用于临床治疗。近年来，大量的临床试验研究也取得令人鼓舞的结果，显示了DC疫苗抗肿瘤免疫治疗的巨大应用前景。
目前，DC疫苗主要有三大类：细胞性肿瘤抗原修饰的DC；肿瘤抗原肽修饰的DC；肿瘤抗原及细胞因子基因转染的DC，现概述如下。
一、细胞性肿瘤抗原修饰的DC
由于目前肿瘤特异性抗原或相关抗原得到明确鉴定的为数甚少，因而予以瘤细胞全部抗原信息 (如肿瘤细胞裂解物、肿瘤细胞提取物、肿瘤细胞的总RNA或经过灭活的完整的肿瘤细胞、肿瘤细胞与树突状细胞的融合 )修饰DC成为最直接的一种方法。基于细胞性肿瘤抗原易于获取和制备，因而应用全细胞性肿瘤抗原冲击致敏DC的方法来制备DC疫苗不失为一种简便而有实效的方法，有较大的临床应用潜力，它也是目前临床研究应用最广泛的方法之一。目前主要用于肾癌、恶性黑色素瘤（恶黑）、前列腺癌和恶性胶质瘤等肿瘤的临床研究。
Gorin等以肿瘤细胞株裂解产物冲击DC，制备疫苗用于转移性恶黑的治疗，在这项多中心的随机对照研究中，可观察到针对肿瘤裂解物多肽或肿瘤相关抗原的抗肿瘤免疫，而且无明显不良反应，进一步的临床疗效还在观察之中。
T. Nesselhut等以肿瘤细胞裂解物或已知多肽或肿瘤特异蛋白冲击DC制备疫苗，用于晚期乳癌患者的治疗，结果143名受试者有56名临床受益，包括（CR7名，PR14名，SD 33名，混合3名），受益者的中位生存期为25个月，3年生存率为16%；非受益者的中位生存期仅为4个月，3年生存率为1%。
在Pandha HS等进行I/II期的临床研究中，11名激素治疗失败的前列腺癌患者和5名转移性肾癌患者接受DC疫苗治疗，疫苗制备采用自体肿瘤细胞裂解物刺激DC，1-3×106DC,皮内注射，每2周1次，共进行6次，而后每月1次，直到疾病进展，结果证实该疗法是安全可靠的，所有的患者体内均可检测到Th1型细胞因子明显升高，有1名前列腺癌患者的PSA明显降低，2名肾癌患者评价为SD（病灶稳定）；Gitlitz BJ等亦进行了一项以DC疫苗治疗转移肾癌的临床研究，DC疫苗通过自体肿瘤细胞裂解物冲击外周血CD14＋单个核细胞诱导成熟的DC制备，10名患者接受免疫，结果有1名患者出现PR（部分缓解）。
在Yu JS等进行的另一项I期的临床研究中，14名恶性胶质瘤患者接受了DC疫苗治疗，采用自体肿瘤细胞裂解物冲击DC制备疫苗，每2周免疫1次，结果亦证实该疗法是安全的，没有自身免疫情况的发生。10名患者中有6名显示出系统细胞免疫的增强，并可以检测到针对一种或多种肿瘤相关抗原如：MAGE-1、gp100和HER-2的特异CTL效应，中位复发时间为133周；Yamanaka R等亦进行了一项以DC疫苗治疗恶性胶质瘤的I/II期的临床研究，10名患者接受了采用自体肿瘤细胞裂解物冲击DC制备的疫苗免疫，平均接受6.9次，结果：影像学评价有2名MR（微小缓解），4名SD。通过检测，5名患者中有2名出现T细胞介导的抗肿瘤效应。而在Caruso D等进行的一项DC疫苗治疗小儿脑癌的I期临床研究中，通过自体肿瘤细胞总RNA冲击外周血单个核细胞并诱导成熟制备DC疫苗。9名患者至少接受3次免疫，结果：可评价的7名患者中，有1名PR，2名SD，而且安全性极高；而在Avigan D等进行的一项DC疫苗治疗转移性肾癌和乳腺癌的I期临床研究中，通过自体肿瘤细胞与DC细胞融合制备疫苗，23名患者接受1 ×105至 4 ×106融合细胞免疫，每3周1次，结果没有治疗相关不良反应的发生，分泌IFN－g的CD4＋和CD8＋T细胞的比例明显升高，2名乳腺癌患者出现病情缓解，5名肾癌患者和1名乳癌患者病情稳定，提示该方法是肾癌和乳腺癌的一种安全合理的疗法。
Nagayama H等进行了一项DC疫苗联合白介素-2(IL-2)治疗IV期恶性黑色素瘤的I期临床研究，DC疫苗制备以自体肿瘤细胞裂解物刺激外周血单个核细胞，并在细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-a作用下诱导成熟，10名IV期恶性黑色素瘤患者接受免疫，1× 107DC,每周1次，共进行10次，同时给予IL-2，剂量为350-700 kIU，每周3次，结果证实无明显不良反应，2名有效（PR＋MR），1名SD；而在Trefzer U等进行的一项DC疫苗治疗III、IV期恶性黑色素瘤临床研究中，通过自体肿瘤细胞与DC细胞融合制备疫苗，17名患者接受免疫和评价，结果1名CR（完全缓解），1名PR，6名SD，生存期显著延长，14名患者中有11名能从外周血中检测到针对特异肿瘤抗原表位的T细胞反应，而无效病例存在肿瘤抗原表位的缺失。
Stift A等进行了DC免疫治疗甲状腺髓样癌的临床研究，通过CD14磁珠分离外周血单个核细胞（DC前体细胞），以自体肿瘤细胞裂解物冲击并诱导成熟制备DC疫苗，此项I期的临床研究中，10例晚期甲状腺髓样癌患者接受免疫，结果亦证实患者容易耐受，10名患者均可检测出细胞免疫的增强， 其中2名PR，1名MR，3名SD，结果提示该DC疫苗是治疗晚期甲状腺髓样癌的理想手段。
选择以细胞性肿瘤抗原修饰的DC方法简便，容易实施，但仍有其不足之处：所需要的瘤细胞数量多；非相关抗原量大且种类多，易诱发自身免疫病；所用的抗原多肽不一定能诱导最佳的抗肿瘤免疫反应，如因抗原调变，抗原脱失或抗原的低免疫原性等原因；刺激剂量难以确定等。
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